重组人胶原蛋白微生物限度检查方法建设验证,该文是关于胶原蛋白论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
胶原蛋白论文参考文献：
摘 要：目的：建立重组人胶原蛋白原料的微生物限度检测方法及控制菌检测方法,并进行方法学验证,用于重组人胶原蛋白原料的质量控制.方法：依据《中国药典》2015版四部通则1105和1106,对重组人胶原蛋白原料需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数进行检测,并对控制菌进行检测.结果：连续3批重组人胶原蛋白原料回收率范围在0.8-1.2之间,符合规定；控制菌检测方法符合规定.结论：重组人胶原蛋白需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数检测采用直接接种法,控制菌检测采用常规法.
关键词：人胶原蛋白；微生物限度；方法建设；方法学验证.
中图分类号：S961.6 文献标志码：A 文章编号：2095-2945（2017）35-0098-02
前言
重组人胶原蛋白是通过生物技术手段构建的工程菌株,经发酵,分离纯化制备的器械原料,其主要成分为重组人胶原蛋白.根据现行标准,应进行细菌总数、霉菌和酵母菌总数以及控制菌检查,根据中国药典2015版四部通则1105,1106规定[1],建立重组人胶原蛋白原料的微生物限度检查方法,验证培养基灵敏度,并进行方法适用性检查,为重组人胶原蛋白原料建立符合质量控制要求的检测方法.
1 设备材料
1.1 材料
胰酪大豆胨琼脂培养基,沙氏葡萄糖琼脂培养基,胰酪大豆胨液体培养基,沙氏葡萄糖液体培养基,麦康凯液体培养基,麦康凯琼脂培养基,甘露醇氯化钠琼脂培养基,溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基均购自陕西标普,氯化钠,聚山梨酯80.
高压灭菌锅（上海申安）,超净工作台（苏净净化）,分析天平（万分之一,奥豪斯）,生化培养箱（上海博泰）,水浴锅.
金 葡萄球菌[CMCC（B）26003],铜绿假单胞菌[CMCC（B）44102],枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501],大肠埃希菌[CMCC（B）44102],白色念珠菌[CMCC（F）98001],黑曲霉[CMCC（F）98003]均购自陕西标普,各菌种的工作菌种均传至第3代.
1.2 供试品
本公司按规定工艺生产的连续3批重组人胶原蛋白冻干海绵,批号分别为：201704010,201704011,201704012.
2 实验方法
2.1 菌液制备
接种金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌,大肠埃希菌,枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中,30～35℃培养18～24小时,培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,20～25℃培养48小时,培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液；接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上,25℃培养5～7天,加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱.然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内,用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌孢子悬液.
2.2 供试品制备
称取供试品1g,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10ml,配制成1：10供试品溶液.
2.3 直接接种法方法适用性检查
2.3.1 供试品组制备
取90mm无菌平皿6块,每块加入1ml供试品溶液,3块平皿注入15-20ml的胰酪大豆胨琼脂培养基,混匀,待凝固,33℃倒置培养3天,逐日观察；3块平皿注入15-20ml的沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,待凝固,25℃倒置培养5天,逐日观察.
2.3.2 实验组制备
取90mm无菌平皿15块,每块加入1ml供试品溶液,再各吸取1ml小于100cfu的金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉至3块平皿,注入15-20ml的胰酪大豆胨琼脂培养基,混匀,待凝固,33℃倒置培养3天,逐日观察；取90mm无菌平皿6块,每块平皿加入1ml供试品溶液,再各吸取1ml小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉至3块平皿,注入15-20ml的沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,待凝固,25℃倒置培养5天,逐日观察.
2.3.3 阳性组制备
取90mm无菌平皿15块,各吸取1ml小于100cfu的金 葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉至3块平皿,均注入15-20ml的胰酪大豆胨琼脂培养基,混匀,待凝固后,33℃倒置培养3天,逐日观察；取90mm无菌平皿6块,各吸取1ml小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉至3块平皿,均注入15-20ml的沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,待凝固后,25℃倒置培养3天,逐日观察.
2.3.4 阴性组制备
各吸取1ml稀释剂至6块平皿,3块注入15-20ml的胰酪大豆胨琼脂培养基,3块注入15-20ml的胰酪大豆胨琼脂培养基,混匀,待凝固,于对应温度倒置培养,作为阴性对照,逐日观察.
2.4 控制菌检查方法适用性验证
2.4.1 实验组制备
取1：10供试品溶液10ml,接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中,加入小于100cfu/ml大肠埃希菌菌悬液,35℃培养18-24小时,取1ml接种于100ml麦康凯液体培养基,44℃培养18-24h,后划线接种于麦康凯琼脂培养基上,35℃倒置培养18-24小时[2]；取1：10供试品溶液10ml,接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中,加入小于100cfu/ml金 葡萄球菌菌悬液,35℃培养18-24小时,后划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基上,35℃倒置培养18-24小时；取1：10供試品溶液10ml,接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中,加入小于100cfu/ml铜绿假单胞菌菌悬液,33℃培养18-24小时,后划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基上,35℃倒置培养18-24小时.
结论：关于对不知道怎么写胶原蛋白论文范文课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文日本胶原蛋白排行榜论文开题报告范文和文献综述及职称论文的作为参考文献资料下载。
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