牡丹红斑病病原鉴定和ITS序列分析,关于免费牡丹论文范文在这里免费下载与阅读,为您的牡丹相关论文写作提供资料。
牡丹论文参考文献：
摘 要：牡丹红斑病是危害牡丹的最重要病害之一.本研究欲通过对病原菌进行鉴定并明确其分类地位.采用形态学方法结合分子标记法对牡丹红斑病病原进行鉴定,利用Mega5软件对枝孢霉属进行系统发育树分析.结果表明：该病致病菌为牡丹枝孢霉,序列和GenBank登录号为GQ395812.1的ITS序列同源性最高,同源性大于99%.聚类分析发现,枝孢霉属可分为7个聚类组,样品菌株和牡丹枝孢霉为一类.分子鉴定和形态学鉴定结果一致,该研究为牡丹红斑病的快速诊断和防治提供了依据,并为枝孢属的系统发育和分类鉴定提供了参考.
关键词：牡丹红斑病；枝孢霉；ITS序列分析；系统发育树
中图分类号：Q945.8 文献标志码：A 论文编号：2014-0024
Abstract： The red spot was one of the most important diseases which harms peony tree. The aim of the research was to clarify its taxonomic status by identifying the pathogen of tree peony leaf spot. In this study, the pathogen was identified based on morphology and molecular identification, the ITS phylogenetic trees of Cladosporium spp. was generated with the soft of Mega 5. The result suggested that the pathogen of tree peony leaf spot was Cladosporium paeoniae, and its sequences had the highest homology with GQ395812.1 in GenBank, whose homology was greater than 99%. Cluster analysis suggested that the Cladosporium spp. could be divided into 7 groups. Samples strains and Cladosporium paeoniae belonged to a class. The molecular identification and morphology identification researched the same results. This paper provided the reference for the rapid diagnosis and prevention of tree peony red spot disease, and the information for phylogenetic and taxonomic identification of Cladosporium spp..
Key words： Tree Peony Red Spot； Cladosporium； Analysis of ITS Sequence； Phylogenetic Tree
0 引言
牡丹红斑病又称牡丹叶霉病,是中国牡丹产区的重要病害之一.此病主要危害牡丹叶片,也侵染叶柄、嫩枝、花器[1].近年来,牡丹红斑病在牡丹产区发生普遍,危害严重,常导致叶片早枯,严重影响植株的生长和花芽分化,是生产实际中急需解决的问题.
目前,对牡丹红斑病的研究主要为其发病规律、药剂防治试验、病原的形态和致病性鉴定等.然而传统形态学鉴定方法研究病原菌多样性存在工作量大、重复性差等缺点[2].随着分子生物学的发展,人们开始利用分子标记方法来鉴定病原菌种类.该方法可用于真菌属、种水平的分类,其序列差异有助于相似种的鉴别[3].ITS区（internal transcribed space）是介于18SrDNA、5.8SrDNA和28SrDNA之间的区域[4],该区域进化速度较编码区快,在种内不同菌株间高度保守,通过和数据库中和同源序列进行比较来确定其种属关系[5-6].国内外对该方法的采用主要集中在疫霉菌（Phytophthora）、锈菌（Puccinia）、炭疽菌（Colletotrichum）和镰刀菌（Fusarium）等,但是对枝孢霉的研究相对较少[7].唐建辉等[8]根据通用引物ITS1和ITS4扩增出西瓜炭疽病菌的ITS区段,对炭疽属24个种进行聚类分析研究了炭疽属的系统发育.陈玉玺等[9]通过对分离到的镰刀菌菌株进行ITS序列测定,构建了相关菌株的ITS序列系统发育树.Gardes[10]以ITS片段为模板,合成了多种引物,其中ITS1-F对真菌有很高的特异性,ITS4-B对担子菌的特异性很高.Curtis等[11]通过对来自不同地区的番茄叶霉病菌ITS序列进行分析比较,鉴定了番茄叶霉病原并证明该病菌种内保守.本研究以传统的形态学特征为基础,对牡丹红斑病病原菌的rDNA-ITS序列进行分析和比对,进而从分子水平上明确牡丹红斑病的病原菌类型.以期加深前人对枝孢霉的研究,快速准确的检测牡丹红斑病,并为该病的防治和抗性品种选育研究提供理论依据.
1 材料和方法
1.1 试验时间、地点
研究田间试验于2013年在山东农业大学牡丹种种质资源圃进行,室内试验在山东农业大学林学院花卉研究实验室进行.牡丹红斑病的病叶采自山东农业大学牡丹种种质资源圃发病严重的牡丹植株.
1.2 试验方法
1.2.1 病原菌的分离和纯化 采用常规的组织分离法进行分离纯化,将明显带有牡丹红斑病病症的病叶用10%的次氯酸钠消毒后切去病健交界处组织分别接种到PDA培养基上25℃培养,待菌落长出后进行纯化[6],一个月后保存于4℃冰箱中备用.
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