橡胶树HAD家族蛋白酸性磷酸化酶基因VSP2表达分析,本文是一篇关于橡胶树论文范文，可作为相关选题参考,和写作参考文献。
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摘 要 植物营养储藏蛋白VSP2是HAD家族蛋白（haloalcanoic acid dehalogenase super family, HAD）的主要成员之一.该蛋白具有酸性磷酸化酶的功能,在橡胶树氮素储存和植物凝集素防御胁迫中发挥着重要的作用.在前期研究中,利用cDNA-AFLP获得了1条和橡胶树棒孢霉落叶病抗病性相关的差异表达片段EST-IAN-24,通过Blast比对分析,发现该基因片段和其他物种的VSP2基因具有较高同源性.采用PCR和RT-PCR技术,克隆获得了一个橡胶树VSP2基因的cDNA和基因组序列,并将该基因命名为HbVSP2.基因序列分析显示,该基因编码区全长（CDS）975 bp,含有4个内含子和5个外显子,编码324个氨基酸,推测该蛋白的分子质量为30.01 ku,等电点为4.80.该基因蛋白是HAD家族蛋白中的酸性磷酸酶,具有DXDXT基序特征.qRT-PCR 定量分析发现,受多主棒孢病菌侵染后,HbVSP2基因在橡胶树抗、感品种中的表达量存在着明显的差异,抗病品种（IAN873）的表达量显著高于感病品种（PR107）,且在接种12 h达到了峰值；此外,该基因在水杨酸、茉莉酸甲酯、乙烯的处理下均能诱导其表达,对茉莉酸甲酯的敏感性明显高于其他2个激素.本研究初步表明,HbVSP2基因可能参和橡胶树和多主棒孢病菌的互作并且和抗病性相关.
关键词 橡胶树；HbVSP2基因；克隆；表达分析
中图分类号 S794.1 文献标识码 A
Abstract VSP, Vegetative storage protein, is one of the main members of haloalcanoic acid dehalogenase super family（HAD）. It has acid phosphatase activity and plays an important role in nitrogen storage and plant lectin defense in rubber tree. In earlier study, we got a differential expression fragment related to Corynespora cassicola resistance in rubber tree with cDNA-amplified fragment length polymorphism（cDNA-AFLP）technology. Blast results showed that this fragment had high homology with VSP2 in other gene species. Using RT-PCR and PCR technology, cDNA and genomic sequences of a rubber tree VSP2 encoding gene OR VSP2 were cloned, and the gene was named as HbVSP2. Sequence analysis revealed that the CDS length of HbVSP2 was 975 bp, encoding a protein of 324 amino acids with molecular weight of 30.01 kD, and pI value of 4.80. Exon/intron structure analysis revealed 5 exons and 4 introns in HbVSP2 genomic sequence. The gene was an acid phosphatase gene,which had the characteristic of DXDXT domain in HAD family protein. The expression pattern of HbVSP2 in rubber plants was assessed by qRT-PCR. The tissue-specific expression analysis indicated that the HbVSP2 was mainly expressed in the stem. When C. cassiicola infected, the expression level of HbVSP2 was significantly higher in the resistant rubber germplasm（IAN873）than in the susceptible rubber germplasm（PR107）. The expression of HbVSP2 was up-regulated under ethylene, salicylic acid and methyl lasmonate treatment, especially methyl jasmonate. These results showed that HbVSP2 involved in rubber tree resistance signal pathway.
Key words Hevea brasiliensis； HbVSP2； Cloning； Expression analysis
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.06.010
植物营养储藏蛋白（Vegetative Storage Proteins, VSPs）是植物营养组织中,氮素和氨基酸临时储存的主要形式,对减少植物在越冬期间营养物质的损失、生物量的积累以及抵抗不良环境的能力具有重要作用[1].相关研究都充分肯定了植物营养贮藏蛋白质（VSPs）在氮素贮藏,植物凝集素积累,以及具有酸性磷酸化酶活性等方面的重要功能[2-4],而VSP2作为植物防御相关蛋白的研究较少.VSP2是一种植物防御蛋白,能被多种因素如病虫侵害、创伤、茉莉酸甲酯等诱导表达,在参和植物抗病信号传导途径中的茉莉酸信号途径中发挥着重要的作用[5-6].VSP在分类上属于HAD家族成员,具有保守的的DXDXT基序[7].Liu等[8]发现VSP2能明显延迟昆虫的发育和增加其死亡率,将保守基序DXDXT中亲和的Asp119进行点突变成谷氨酸,会导致VSP2酸性磷酸化酶活性完全丧失,同时抗虫活性也完全丧失.Berger等发现vsp1和vsp2 mRNA及蛋白的表达能被昆虫的食草作用诱导[5].cev1突变体组成型表达VSP1和VSP2,具有更高的抗病性[6].上述研究揭示了拟南芥中的VSP2可能是一种防御蛋白,其防御功能和酸性磷酸酶的活性有关.
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