利用RAPD、ISSR分子标记分析野牡丹属亲缘关系,本论文为您写亲缘关系毕业论文范文和职称论文提供相关论文参考文献，可免费下载。
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摘 要 采用ISSR和RAPD分子标记技术对9个种44份野牡丹属种质资源进行了亲缘关系分析.结果表明：11条ISSR引物共扩增出91条谱带,其中多态性条带90条,多态性条带的比率为98.9%；16 条RAPD引物共扩增出113条谱带,其中101条多态性条带,多态性比率为89.38%.2种分子标记相比较,ISSR分子标记检测出的多态性比率更高.44份野牡丹属种质明显聚为2组,种质资源遗传相似系数在0.61～0.88,平均相似系数0.75.基于不同引物的条带组合构建了供试的44份野牡丹属种质资源的ISSR和RAPD指纹图谱,采用这2种指纹图谱可对供试的所有野牡丹属种质资源进行鉴定.
关键词 野牡丹属；种质；分子标记；亲缘关系；指纹图谱
中图分类号 S682.39 文献标识码 A
野牡丹科（Melastomaceae）植物全世界约240个属,共3 000余种[1].野牡丹属（Melastoma）属于野牡丹科,大约有100个种,分布中心处于东南亚一带,中国有9个种和1个变种,主要分布带处于长江以南各个省区[2].野牡丹属植物花色有白色系、粉色系、紫色系,其花期长、花量大,株型从地被、灌木到小乔木均有分布,园林运用上可做到周年有花（花期：地菍、印度白花野牡丹四季开花,展毛野牡丹3～4月,紫毛、多花、细叶野牡丹、毛菍5～6月份,野牡丹、毛菍7～8月）,具备良好的观赏性状；此外,该属植物的药用价值近来也有深入研究[3-4],发展前景广泛.目前,绝大多数的野牡丹属植物仍未被人工开发利用,已在野牡丹属种质资源的收集及评价[5-9]、栽培技术[10]、脱毒育苗[11-13]、传粉特性[14-15]以及种子发育[16]等方面进行了研究.
目前,针对野牡丹属的分类研究主要集中于宏观形态学[16]、细胞遗传学[17]、孢粉学[18]、细胞学[19]、表型多样性[20-21]等方面,利用分子标记对野牡丹种质资源的遗传性进行研究还比较少.郑涛等[22]利用ISSR分子标记对福建省33份野牡丹属种质资源的遗传多样性进行研究,聚类分析表明,34份材料可划分为3个类群5个亚类,主坐标散点分析可分为4个类群,这和根据形态学划分的结果基本一致.野牡丹属因为分布范围广、自然杂交类型丰富,一些野生种质的分类尚未十分明确,给人工杂交亲本选择带来了不少困扰.因此,本研究在前期研究的基础上扩大了取样范围,以中国的44份野牡丹属种质为研究对象, 利用ISSR和RAPD分子标记技术,再次从分子水平上探讨野牡丹属内的亲缘关系,为有效利用分子标记评价野牡丹属种质资源遗传多样性及遗传基础提供理论依据,同时,利用筛选出的通用引物构建44份野牡丹属野生种质资源的RAPD、ISSR指纹图谱,为野牡丹属野生种质资源快速鉴定及后期人工选育种亲本选择提供理论参考.
1 材料和方法
1.1 材料
本研究供试材料为野牡丹属野生种质资源共9个种44份材料,来源于福建、广东、广西、海南、云南5个省份.采集新鲜叶片冻于液氮,保存在-80 ℃.
1.2 方法
1.2.1 DNA提取 采用前期试验确定的改良CTAB法提取野牡丹基因组DNA,通过1%琼脂糖凝胶电泳检测,并用分光光度法定量后,-20 ℃保存备用.
1.2.2 PCR扩增 ISSR-PCR反应体系的建立：DNA模板（30 ng/μL）0.7 μL,10×buffer 2 μL,dNTPs（10 mmol/L）0.6 μL,引物（10 μmol/L）0.8 μL,Taq酶（5 U/μL）0.1 μL,ddH2O定容20 μL.反应程序：反应程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性1 min；53 ℃退火40 s；72 ℃延伸2 min.
PAPD-PCR反应体系的建立：DNA模板（20 ng/uL）1.5 μL,10×Taq Green Buffer（含Mg2+）2 μL,引物（10 μmol/L）0.7 μL,dNTPs（10 mmol/L）0.4 μL,Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.3 μL,ddH2O定容20 μL.反应程序：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性1 min,38 ℃退火40 s,72 ℃延伸2 min,45个循环；最后72 ℃延伸5 min,4 ℃保存.
1.2.3 引物筛选 从116条ISSR、100条RAPD随机引物中分别筛选出11条、16条多态性好、条带清晰的引物供PCR反应（表2、表3）.
1.3 数据处理
根据2种分子标记方法通过PCR反应扩增出的条带图片,对同一引物所扩增出迁移率相同的条带计为1个位点,有条带的位置计为“1”,无条带位置计为“0”,所得数据输入Excel 2003工作表建成原始“0/1”数据矩阵,利用NTSYS聚类分析软件进行聚类分析.针对所有供试品种,对11条ISSR引物和16条RAPD引物扩增出的条带进行比对,选出鉴别能力较强的引物,然后对由这些引物经PCR反应跑出的电泳条带进行形象化处理,同一位点上记为“1”的电泳条带用黑色方块表示,记为“0”的条带用白色方块表示,据此构建出供试的44份野牡丹属种质资源的DNA指纹图谱.
2 结果和分析
2.1 ISSR分子标记结果和分析
本研究以前期试验筛选出的11条ISSR随机引物对供试的44份野牡丹属种质资源进行DNA多态性检测[16],总共扩增出91条清晰度好,重复性高的谱带,其中多态性谱带有90 条,多态性条带比例为98.9%（表2）.扩增结果表明,扩增位点最多的引物为UBC857 、UBC811和CW32506,位点数均为12个.其中引物UBC857对44份野牡丹属种质DNA的扩增图谱见图1.
2.2 RAPD标记结果和分析
结论：大学硕士与本科亲缘关系毕业论文开题报告范文和相关优秀学术职称论文参考文献资料下载，关于免费教你怎么写亲缘和血缘的区别方面论文范文。
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