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[摘 要]研究了消毒时间、基本培养基、不同激素组合、光照长度对山茱萸腋芽诱导及增殖影响.结果表明：用0.1%升汞溶液+吐温80消毒处理山茱萸嫩茎14～16min,外植体的污染和死亡得到较好控制,成活率高达85.5%.在1/2MS基本培养基中,添加6-BA1.0mg·L-1+GA0.5 mg·L-1+IBA0.5mg·L-1腋芽诱导增殖系数达4.8；在山茱萸腋芽诱导增殖阶段,能获得较高的增殖系数而又能较好控制玻璃化苗率光照时数应14 h/d.
[关键词]]山茱萸；腋芽诱导；增殖
[中图分类号]Q945.45 [文献标识码]A
山茱萸（Macrocarpium officinalis）為山茱萸科、山茱萸属的落叶灌木、小乔木,是我国传统的珍贵中药材,也是一味集观赏、药用、食用和材用于一体的多用途植物.湖北襄阳种植山茱萸历史悠久,但山茱萸的常规繁殖中种子繁殖速度慢且变异率大,扦插繁殖成活率、生根率低,嫁接繁殖则需要耗费大量的劳力和财力.所以利用组织培养技术来获取山茱萸优良无性系后代,快速高效地获得大量无性系组培苗,是山茱萸规模化种植的必然趋势.本试验通过基本培养基、不同激素组合、光照长度等对山茱萸腋芽诱导增殖影响的研究,筛选出有利于腋芽诱导增殖的基本培养基及激素的最佳组合等条件,为建立稳定的高频再生系统,实现山茱萸工厂化、规模化生产提供技术支持.
1 试验材料和方法
1.1 试验材料
采自湖北襄阳保康山茱萸盛果期当年生的嫩茎.
1.2 试验方法
1.2.1 外植体的消毒灭菌.将嫩茎用洗衣粉浸泡30分钟后流水冲洗,再放入75%酒精浸泡30s,然后在0.1%升汞溶液+吐温80中分别灭菌8～10min、11～13 min、14～16min、17～19 min,用无菌水冲洗4～5次,在超净台上将嫩茎切成1～1.5cm茎段,每段带1个腋芽,接种在1/2MS培养基上,每组50瓶.7d后观察茎段生长状况、成活率.培养条件为温度23±2℃,每日光照14h,光强2000～3000Lx.
1.2.2 基本培养基对山茱萸腋芽诱导增殖影响.将成活10d的山茱萸茎段转接在添加6-BA1.0mg·L-1+GA0.5 mg·L-1+IBA0.5 mg·L-1的1/2MS、MS、B5、WPM基本培养基上,每组20瓶,每瓶1个茎段,重复3次.培养条件为温度23±2℃,光照14h·d-1,光强2000～3000Lx.培养30d后观察山茱萸茎段腋芽生长及增殖情况.
1.2.3 激素对山茱萸腋芽诱导增殖影响.在无菌操作台上将生长健壮山茱萸瓶苗分切1～1.5cm大小带叶茎段,单株转接到添加不同激素配比的1/2MS培养基中（6-BA mg·L-1：0.5、1.0、2.0,GA mg·L-1：,0.1、0.5、1.0；IBA mg·L-1：0.05、0.1、0.5）,每瓶5株.利用L9（34）正交表安排试验,每处理20瓶,重复3次.培养条件为：温度（23±2）℃,光照14h·dˉ1,光照强度2000～3000Lx.30d后观察记录腋芽诱导增殖生长状况.
1.2.4 光照对山茱萸腋芽诱导增殖的影响.光照强度为2000～3000 Lx,光照长度设置4个水平：10h/d 、12h/d 、14h/d、16h/d.将山茱萸茎段转接在添加6-BA1.0mg·L-1+GA0.5 mg·L-1+IBA0.5 mg·L-1的1/2MS培养基上,每组20瓶,每瓶5个带叶茎段,重复3次.培养条件为温度23±2℃.培养30d后观察山茱萸茎段腋芽生长及增殖情况.
以上1/2MS培养基均加入0.8%琼脂,3%的蔗糖.培养基pH为5.8.
2 结果与分析
2.1 HgCl2消毒处理时间对山茱萸外植体灭菌效果的影响
用0.1%升汞溶液+吐温80消毒处理山茱萸嫩茎,消毒时间短,则污染率高,消毒时间过长,污染率会降低,但会杀死嫩茎,这样都会导致接种嫩茎成活率低.从试验结果（表1）看,用0.1%升汞溶液+吐温80消毒处理山茱萸嫩茎8～10min,污染率高达79.3%,外植体成活率20.7%.随着消毒处理增加,外植体污染率大大下降,但死亡率增加.当消毒处理时间增加到17～19 min,污染率降到0,死亡率增加到63.3%,所以成活率36.7%.只有当消毒处理时间控制在14～16min时,虽然外植体污染率10.5%,但死亡率只有4%,使成活率为最高,达到85.5%.因此,自室外采集山茱萸嫩茎作为外植体,用0.1%升汞溶液+吐温80消毒处理,时间最好14～16min,此时外植体的污染和死亡得到较好控制,成活率高达85.5%.
2.2 基本培养基对山茱萸腋芽诱导增殖影响
接种在添加6-BA1.0mg·L-1+GA0.5 mg·L-1+IBA0.5 mg·L-1的1/2MS、MS、B5、WPM基本培养基上的山茱萸嫩茎段,培养了2周后腋芽陆续开始萌动生长并增殖形成丛芽,30d后调查结果见表2.在MS培养基上萌动的山茱萸腋芽生长很缓慢,叶片卷曲、玻璃化较严重.在1/2MS、B5、WPM基本培养基上萌动的山茱萸腋芽虽然生长正常,生长速度基本一致,但腋芽增殖的系数有明显差异.其中1/2MS基本培养基上诱导的腋芽丛增殖系数最高为4.8.因此,对比4种基本培养基的腋芽丛诱导及增殖的表现,1/2MS基本培养基是最适合山茱萸腋芽诱导增殖的.
2.3 激素对山茱萸腋芽诱导增殖的影响
山茱萸带叶茎段在L9（34）正交试验9个不同激素配比的处理培养基中培养30天时,均呈现了不同程度的腋芽生长及增殖,增殖腋芽丛苗的生长状况也出现了较大差异.
由表3显示,在处理1～3中,增生的腋芽苗基部都形成愈伤,且生长素所占比例越多的形成的愈伤越多；在处理7～9中,增生的腋芽丛苗都表现为玻璃化,且分裂素所占比例越多的玻璃化现象越严重；在处理5（6-BA1.0+GA0.5+IBA0.5）中,腋芽丛芽诱导增殖效果最好,增殖系数达4.8,而且苗生长健壮,叶色浓绿,达到生根苗的要求,不需要壮苗就可以直接生根培养.这也说明保持一定的细胞分裂素和生长素两类激素的比例对植物的芽增殖很重要.因此,由L9（34）正交表试验结果可知,在1/2MS（琼脂0.8%）基本培养基中最适合山茱萸腋芽诱导增殖的激素配比组合是6-BA1.0 mg·L-1+GA0.5 mg·L-1+IBA0.5 mg·L-1.
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